Začněte je používat i vy.

Proč se omezovat klasickými protilátkami, když přesnost závisí na detailech?

Ve světě moderní fluorescenční a super-rezoluční mikroskopie už dávno není limitujícím faktorem optika. Je jím samotné značení. Klasické IgG protilátky jsou obrovské – často větší než struktury, které se snažíte zobrazit. Výsledkem je šum, špatná lokalizace, omezená penetrace a ztráta přesnosti tam, kde každý nanometr hraje roli.

Nanobody (jednodoménové protilátky) jsou jiná liga: 
•    Pouhých 15 kDa oproti 150 kDa u IgG
•    Rozměr okolo 3 nm
•    Přesná vazba na specifický epitop
•    Minimální linkovací chyba
•    Výjimečná stabilita, rozpustnost a pronikání tkáněmi


A co je nejdůležitější: už jsou plně dostupné přímo v ČR. SVEN BioLabs vám nyní přináší kompletní řadu nanobody řešení FluoTag® od NanoTag Biotechnologies, kombinovanou s nejmodernějšími barvivy abberior STAR®.

 

Proč právě nyní začít používat nanobodies?

Přesnost, která mění pravidla hry

Každý FluoTag® je monoklonální, monovalentní a navržený tak, aby nesl přesně definovaný počet fluoroforů na známých pozicích. To zajišťuje konzistentní a kvantifikovatelné výsledky napříč experimenty.

Maximální signál, minimální objem

  • FluoTag®-X4 anti-GFP využívá dva sdAb klony (#1H1 a #1B2), každý zaměřený na jiný epitop GFP. Každý z nich nese 2 fluorofory – celkem tedy 4 signály na jednu molekulu GFP.
  • FluoTag®-X2 Smart Secondaries® se vážou na Fc doménu běžných protilátek. Opět – 2 nanobodies po 2 fluoroforech = čtyřnásobné zesílení signálu i u běžných protilátek.

Práce bez kompromisů

  • Přímé značení pro proteiny s GFP tagem – rychlé, jednoznačné, bez další protilátky
  • Nepřímé značení s druhotnými nanobodies – perfektní pro multiplexing i se shodným izotypem
  • „Premix & Stain“ přístup: jednoduchá příprava, vysoká efektivita

 

Fluorofory, která odpovídají vašemu systému

Abberior STAR® fluorofory byly navrženy na míru STED mikroskopii, ale skvěle fungují i v konfokální optice. Pokrývají celé spektrum:


 

Jejich výhody? Vysoká fotostabilita, nízké pozadí a jasný signál – ideální pro STED, ale i běžné konfokální snímky.

Co vám nanobodies skutečně přinesou?

Vyšší rozlišení
Zásadní výhodou nanobodies je jejich extrémně malá velikost. Klasická IgG sekundární protilátka má molekulovou hmotnost přibližně 150 kDa a tvoří objemný značicí komplex, který často přesahuje samotnou strukturu, již se snažíme zobrazit. Naproti tomu nanobodies jsou jednodoménové protilátky o velikosti pouhých 15 kDa – tedy zhruba desetkrát menší.

Nejde přitom jen o „kratší délku“, ale o celkově výrazně menší prostorový objem značicí molekuly. Fluorofor je díky tomu lokalizován mnohem blíže cílovému proteinu, což vede k výraznému snížení tzv. linkage error. Výsledkem je přesnější lokalizace signálu, ostřejší obraz a lepší rozlišení jemných struktur, což je klíčové zejména v konfokální a super-rezoluční (STED) mikroskopii.

Menší rozměry navíc znamenají podstatně lepší penetraci do hustého biologického materiálu – nanobodies se snadno dostanou i do těsně uspořádaných buněčných kompartmentů a silnějších vzorků, kde klasické protilátky často selhávají.

Větší spolehlivost
Nanobodies jsou monoklonální a monovalentní sdAb, které se vážou přesně na jeden definovaný epitop. Nedochází tak k nežádoucímu shlukování cílových proteinů, umělému crosslinkingu ani ke křížovým reakcím. Značení je čisté, reprodukovatelné a biologicky relevantní – ideální pro kvantitativní i vysoce rozlišovací experimenty.

Snazší práce
Používání nanobodies neznamená složitější workflow – právě naopak. Protokoly jsou jednoduché a plně kompatibilní s běžnými experimentálními postupy. Nanobodies lze využít jak pro přímé značení GFP tagovaných proteinů, tak pro nepřímé značení pomocí sekundárních nanobodies, a to bez nutnosti měnit izotypy, druhy primárních protilátek nebo celé experimentální schéma. Přechod na nanobodies je proto přirozený, rychlý a bezbolestný.


Konfokální a STED snímky stabilní buněčné linie U2OS-NUP96-GFP fixované PFA, obarvené FluoTag®-X4 anti-GFP abberior STAR RED. FluoTag®-X4 anti-GFP se specificky váže na GFP fúzované s NUP96, což umožňuje vizualizaci jemné struktury nukleoporinů v komplexu jaderných pórů (NPC) na STED snímku.
(zdroj: https://info.abberior.com/new-abberior-star-conjugated-fluotag-monoclonal-nanobodies)
 

Jaké produkty jsou k dispozici?

✅ Pro GFP-tagované proteiny:

  • FluoTag®-X4 anti-GFP s abberior STAR® 460L / GREEN / ORANGE / RED

✅ Pro myší protilátky (IgG1):

  • FluoTag®-X2 anti-mouse IgG1 – stejné barvy, stejný výkon

✅ Pro králičí protilátky:

  • FluoTag®-X2 anti-rabbit IgG

✅ Pro multiplexing:

  • Smart Secondaries® – perfektní sekundární značení i při použití více primárních protilátek stejného druhu

Pro koho jsou nanobody ideální?

  • Laboratoře zaměřené na konfokální a STED mikroskopii
  • Výzkumníci, kteří chtějí zobrazit jemné intracelulární struktury
  • Týmy hledající rychlé, reprodukovatelné značení
  • Vědci, kteří potřebují přesnou lokalizaci v hustém buněčném prostředí
  • Každý, kdo už používá GFP-fúze – a chce získat z nich maximum

Prozkoumejte doporučené protokoly:

Pro znační GFP pro zesílení signálu:
https://abberior.rocks/expertise/protocols/gfp-boosting-labeling-protocol/

Pro multiplexing:
https://abberior.rocks/expertise/protocols/premix-stain-protocol/

Neváhejte. Začněte značit lépe.

Značení pomocí nanobodies není experiment – je to osvědčený standard nové generace.
Je to jednodušší, přesnější, rychlejší. A dostupné právě teď – bez čekání, bez složitých objednávek ze zahraničí.
SVEN BioLabs je oficiálním distributorem řešení od NanoTag Biotechnologies a abberior v České republice. Poradíme vám s výběrem, zaškolíme vás, zajistíme dodání – a pomůžeme vám přejít na nový standard značení bez stresu.

🔗 Jste připraveni?
Odkazy na jednotlivé produkty, datasheety a protokoly najdete níže.
Pokud si nejste jisti výběrem – kontaktujte nás, pomůžeme vám začít.