Manuální platforma pro zpracování reverzně hybridizačních čipů

Platforma HybriSpot HS12 je IVDR certifikovaný přístroj, který umožňuje poloautomatizované zpracování reverzně-hybridizačních čipů firmy Vitro

HybriSpot HS12 pojme až 12 vzorků během procesu hybridizace, jako vzorek pro hybridizaci je třeba mít k dispozici biotinylované PCR produkty. Ty je nutné připravit dle návodu k soupravě (primery i proby jsou součástí soupravy) v externím PCR cycleru, postačí běžný endpoint cycler.

Režim průvodce navádí uživatele pro správné přidávání reagencií během hybridizačního procesu. Přístroj reagencie na čipech inkubuje dle spuštěného programu (jsou k dispozici programy pro všechny typy reverzně-hybridizačních kitů firmy Vitro) a po ukončení inkubačního či promývacího kroku jsou reagencie automaticky odsány od odpadní nádoby a uživatel je přístrojem vyzván k napipetování další reagencie. Po dokončení celého procesu jsou čipy automaticky vysušeny a tak připraveny k vyhodnocení. Nakonec jsou výsledky na čipech snímány externí kamerou a vyhodnoceny pomocí software Hybrisoft. Celý proces (bez PCR) trvá cca 50 minut, po odstranění čipů z platformy je uživatel dále vyzván k provedení údržby, která spočívá v externím i interním promytí celého systému a pak je tento opět připraven k okamžitému použití.

Výhodou tohoto uspořádání je operativnost celého workflow, protože nejdelší krok, kterým je PCR, probíhá v externím cycleru. Je tak možné provádět hybridizaci s dříve připravenými biotinylovanými amplikony, v mezičase spustit další PCR s novými vzorky a produkty začít hybridizovat opět ihned po jejím skončení (protože hybridizační krok na HS12 je výrazně kratší než PCR). Takto je možné během jednoho dne spustit analýzu vícekrát, což je výhodné u rutinních laboratoří, které přijímají vzorky v průběhu celého dne. Další nespornou výhodou je příznivá cena přístroje HS12 a to včetně nízkých nákladů na bezpečnostně technické kontroly.

Princip Metody

Metoda reverzní hybridizace funguje na principu léty prověřené technologie, která využívá hybridizační princip prob imobilizovaných na membráně. Tyto membrány byly dříve nitrocelulózové, kdy reakce probíhala pouze na povrchu membrány, v soupravách Vitro jsou používány nylonové s lepšími vlastnostmi. U nylonové membrány reakce probíhá v trojrozměrném prostředí, kdy roztok membránou protéká (proto je v názvu soupravy uvedeno „flow chip“), což zajišťuje vyšší specificitu i sensitivitu reakce. Proby ve specifických pozicích jsou při stringentní teplotě (optimalizované pro každou metodu) inkubovány s PCR produktem, který byl při předchozí multiplexové amplifikaci biotinylován. Po jejich specifickém navázání je membrána promyta a signál vizualizován prostřednictvím imunoenzymatické kolorimetrické reakce se streptavidin-alkalickou fosfatázou a chromogenem (NBT-BCIP), která vytváří nerozpustné precipitáty v membráně v těch místech, kde došlo k hybridizaci. Výsledky se analyzují pomocí softwaru