SmartBatch+

Name: SmartBatch+
Availability: InStock

Systém pro aktivní tissue clearing a imunobarvení

LifeCanvas SmartBatch+ je vysokokapacitní elektroforetický systém určený pro rychlé aktivní tissue clearing a imunobarvení velkých intaktních biologických vzorků. Kombinací technologií Clear+, Stochastic Electrotransport (SE) a eFLASH v jedné poloautomatické platformě umožňuje SmartBatch+ rychlou, reprodukovatelnou a efektivní přípravu vzorků pro fluorescenční mikroskopii. Na rozdíl od konvenčních pasivních metod, které jsou založeny pouze na difuzi, SmartBatch+ aktivně urychluje transport detergentů a protilátek skrz tkáň pomocí rotujícího stejnosměrného elektrického pole. Tím výrazně zkracuje dobu zpracování vzorků, zlepšuje penetraci reagentů a zajišťuje homogennější značení tkání. Díky tomu je systém ideální pro přípravu velkých orgánů, jako jsou celé myší mozky, plíce, játra, ledviny a další intaktní biologické vzorky

Klíčové technologie

Clear+ – elektroforetická metoda tissue clearingu, která odstraňuje lipidy při současném zachování struktury tkáně a endogenní fluorescence. Výsledkem jsou vysoce transparentní vzorky s minimální expanzí nebo smrštěním tkáně.
Stochastic Electrotransport (SE) – patentovaná technologie využívající rotující elektrické pole k aktivnímu transportu vysoce pohyblivých molekul, jako jsou micely detergentů nebo protilátky, hluboko do tkáně. Ve srovnání s pasivní difuzí výrazně urychluje tissue clearing i imunobarvení.
eFLASH – technologie aktivního imunobarvení celých orgánů, která kombinuje technologii SE s řízenými podmínkami vazby protilátek. Umožňuje rychlé a homogenní značení celého vzorku při minimalizaci hromadění protilátek na jeho povrchu.

Klíčové vlastnosti

Aktivní tissue clearing nebo imunobarvení až 12 celých myších mozků, 4 celých potkaních mozků nebo obdobně velkých vzorků v jednom běhu.
Celková doba kompletního porotokolu (SHIELD fixace + aktivní delipidace + aktivní barvení + vyrovnání indexu lomu): 1,5 víkendu.
Homogenní značení celých orgánů při minimální spotřebě protilátek.
Zachování signálu endogenních fluorescenčních proteinů bez nutnosti dodatečného imunobarvení.
Poloautomatický workflow s jednoduchým přepínáním mezi režimy tissue clearingu a imunobarvení pouhou výměnou použitých pufrů a nastavení SmartBatch+ přístroje
Kompatibilita se širokou škálou tkání a modelových organismů


Pasivní imunobarvení – cFos + CUBIC clearing	Aktivní imunobarvení – cFos + Aktivní clearing

Workflow systému SmartBatch+

1. Perfuze a fixace
Úspěšný tissue clearing začíná kvalitní přípravou vzorku. Správně provedená transkardiální perfuze následovaná fixací v čerstvě připraveném paraformaldehydu (PFA) je nezbytným předpokladem pro dosažení optimálního tissue clearingu, imunobarvení i výsledné kvality obrazu.

2. Stabilizace pomocí SHIELD (volitelné, doporučené)
Fixace pomocí SHIELD stabilizuje strukturu tkáně a zároveň zachovává endogenní fluorescenční proteiny i další biomolekuly během všech následujících kroků zpracování.
Praktickou výhodou je také možnost uchovávat vzorky fixované metodou SHIELD až do doby, než je k dispozici dostatečný počet vzorků pro jejich společné zpracování v jednom běhu.

3. Aktivní tissue clearing (Clear+)
SmartBatch+ kombinuje pasivní inkubaci vzorků v reagentech s aktivní elektroforetickou delipidací, která umožňuje rychlé odstranění lipidů při zachování morfologie tkáně.
Po následném vyrovnání indexu lomu pomocí EasyIndex™ se vzorky stanou vysoce transparentními a jsou připraveny k přímému snímání v případech, kdy postačuje endogenní fluorescence nebo autofluorescence tkáně.

4. Active Immunolabeling (Optional)
Pokud je potřeba zobrazit specifické buněčné nebo molekulární markery, umožňuje SmartBatch+ rychlé aktivní imunobarvení celých orgánů pomocí workflow Radiant™. Na rozdíl od běžných pasivních metod jsou protilátky aktivně transportovány skrz tkáň pomocí technologie SE, což zajišťuje výrazně rychlejší penetraci a homogenní značení i velkých intaktních orgánů. Workflow Radiant™ využívá optimalizované pufry a řízené podmínky reakce, které minimalizují hromadění protilátek na povrchu tkáně a zajišťují jejich rovnoměrnou distribuci v celém vzorku.

5. Vyrovnání indexu lomu
Posledním krokem přípravy vzorku je vyrovnání indexu lomu pomocí EasyIndex™ (RI = 1,52). Tento index lomu odpovídá indexu lomu proteinů, čímž minimalizuje rozptyl světla a maximalizuje optickou transparentnost vzorku. Výsledkem je vysoce transparentní vzorek umožňující hluboké zobrazování s minimálními optickými aberacemi a maximální kvalitou obrazu pro light-sheet mikroskopii.

6. Snímání
Připravené vzorky lze přímo upevnit do držáku pro snímání nebo je před měřením zalít do agarózy. Následně jsou připraveny ke snímání pomocí mikroskopu SmartSPIM nebo jiných kompatibilních light-sheet mikroskopů.

Kompletní workflow přípravy vzorků

SmartBatch+ nabízí flexibilní pracovní postup, který lze přizpůsobit typu vzorku i požadavkům experimentu. V závislosti na aplikaci lze využít pouze aktivní tissue clearing pro zobrazování endogenní fluorescence nebo autofluorescence, případně celý workflow zahrnující aktivní imunobarvení specifických buněčných či molekulárních markerů. Následující schéma znázorňuje kompletní doporučený pracovní postup od fixace vzorku až po jeho přípravu pro snímání pomocí light-sheet mikroskopie.