Díky zkušenostem a odborným znalostem společnosti ViraQuest jsou naši vědci připraveni vám pomoci od počátečního návrhu subklonování až po závěrečnou kontrolu kvality vašeho nového virového konstruktu.
Technologie RAPAd®: Vysoký titr virů, který je rychlý a je RCA-free
Náš expresní systém RAPAd® umožňuje vyrobit vaše adenovirové částice na míru již za 3 týdny. Většinu insertů lze subklonovat v jediném kroku do snadno použitelného shuttle-plazmidu, který obsahuje silné virové promotory pro maximální genovou expresi. Pokud máte zájem o tkáňově specifické promotory, můžeme vám poskytnout shuttle-plazmid bez promotoru, do kterého si můžete naklonovat promotor podle vlastního výběru!
Možnosti subklonování – váš klon nebo náš?
Náš tým může provést subklonování s cDNA dodanou vaší laboratoří, nebo můžeme cDNA zajistit za vás. Naše služby subklonování zahrnují sekvenování 5’ a 3’ konců nebo celého insertu, pokud byla v rámci klonovací strategie použita PCR. Pokud dáváte přednost provedení subklonování sami, můžeme vám zaslat naše shuttle plazmidy a poskytnout technickou pomoc s klonovací strategií.
Pokud potřebujete syntetický produkt, shRNA, miRNA, mutace nebo modifikace vašeho konstruktu, můžeme zajistit i to. Doba zpracování syntézy je obvykle přibližně jeden týden.
Duální expresory – využití oblasti E3
Můžeme vyrobit váš nový adenovirus s reportérovým genem nebo genem podle vašeho výběru v oblasti E3 nosné struktury. Tím se eliminuje nutnost dvojité infekce a zaručuje se, že každá buňka obdrží obě expresní kazety. Duální expresory mohou být užitečné také při dodávání sekretovaných genových produktů, heterodimerů nebo multivalentních vakcín.
Rekombinace a amplifikace
Jakmile bude výsledek potvrzen sekvenováním nebo funkční analýzou, náš tým provede rekombinaci shuttle-plazmidu s vhodnou nosnou strukturou za účelem vytvoření virových částic. Následně provedeme počáteční transfekci a sériové amplifikace, abychom získali lyzáty ve velkém měřítku pro purifikaci na CsCl gradientech. Pokud disponujete adenovirem, který jste si vytvořili sami nebo jste jej obdrželi od spolupracovníka, můžeme k amplifikaci a purifikaci částic využít vaši výchozí kulturu.
Strategie purifikace
Náš purifikační protokol zahrnuje 2 cykly CsCl gradientů, dialýzu proti pufru podle vašeho výběru a následně finální přípravu. Naše typická koncentrace je 1e12 částic/ml v alikvotech o objemu 1 ml. Purifikované částice jsou vhodné pro přímou injekci při in vivo experimentech nebo pro buněčné kultury. Při výrobě můžeme virus připravit ve vyšších koncentracích a v menších alikvotních částech. To se obvykle používá pro in vivo experimenty, které vyžadují vysokou virovou zátěž v malých objemech, a eliminuje jakékoli cykly zmrazování a rozmrazování hotového produktu. Pokud máte specifické požadavky na pufr, můžeme váš virový přípravek připravit ve skladovacím pufru podle vašeho výběru.
Kontrola kvality
Provádíme kontrolu kvality všech virových přípravků vyrobených v našem zařízení. Před odesláním jsou všechny viry testovány na sekvence E1a pomocí PCR založené na DNA, abychom zajistili, že v virovém přípravku nejsou žádné revertanty. Údaje z PCR také potvrzujeme buněčným testem a stanovujeme titr PFU, přičemž garantujeme ≥ 1e10 PFU/mL a žádnou detekovatelnou RCA. Ke každé nové šarži je přiložen 50 uL vzorek pro testování, který vám umožní zkontrolovat genovou expresi, zatímco my dokončujeme buněčné testy. Formuláře s konečnou charakterizací zasíláme e-mailem po dokončení všech testů.
Výroba v souladu s předběžnými požadavky GMP
Pro vaše laboratoře splňující požadavky GMP můžeme dodat vysoce kvalitní produkty s referenčními údaji. Tyto služby zahrnují:
- Čištění plaku
- Sterilita (FTM a TSB)
- Titr PFU
- Poměr částic k PFU
Proces RAPAd® pro produkci adenoviru
Anderson RD, Haskell RE, Xia H, Roessler BJ, Davidson BL.
Gene Ther. 2000 Jun;7(12):1034-8. doi: 10.1038/sj.gt.3301197. PMID: 10871752.
Obchodní tajemství
Všechny projekty společnosti ViraQuest Inc. jsou zpracovávány s nejvyšší důvěrností. Zveřejnění nebo popis vašich virových materiálů je zcela na vašem uvážení. Jelikož vaše virové částice neprodáváme, nenajdete u nás seznam virů, které jsme vyrobili pro klienty. Pokud máte zájem o viry vyprodukované společností ViraQuest Inc., které již byly publikovány, vynasnažíme se vás zkontaktovat s původním výzkumníkem, který tyto částice vyprodukoval. Většina našich klientů je ochotna sdílet své materiály, proto se prosím informujte, jaké viry máme k dispozici.